Resumo

Introdução: Em estudos anteriores mostramos que a exposição à nicotina e ao etanol causam morte celular e redução das densidades neuronal e glial no hipocampo de camundongos adolescentes. Visando verificar se estes efeitos persistem após o término da exposição, neste estudo nós quantificamos a morte celular por apoptose e alterações nas densidades neuronal e glial nas seguintes regiões do hipocampo: camada Granulosa do Giro Denteado (GrDG), camada Molecular (Mol) e nas regiões CA1, CA2 e CA3 de camundongos previamente expostos à nicotina (NIC), ao etanol (ETOH) ou à nicotina+etanol (NIC+ETOH) durante a adolescência Metodologia: Do 30º ao 45º dia pós-natal (PN30-PN45), camundongos C57BL/6 machos e fêmeas foram expostos à nicotina (NIC) e/ou etanol (ETOH). Assim, quatro grupos experimentais foram utilizados: NIC+ETOH (2g/kg de etanol, 25% i.p. em dias alternados + 50 mg/ml de nicotina em 2% sacarina para beber), ETOH, NIC, ou VEH (salina i.p. + sacarina via oral). Dois ou cinco dias após a retirada das drogas os animais foram sacrificados e em seguida os cérebros foram processados: Para a análise de células apoptóticas (PN47: 25 machos e 22 fêmeas de 15 ninhadas; PN50: 29 machos e 23 fêmeas de 20 ninhadas) foi utilizado o método de marcação do terminal 3’-OH do DNA pela desoxinucleotidil transferase (TUNEL-In Situ Cell Death Detection Kit, Roche, Mannheim, Germany) e para contagem de neurônios e glia (PN47: 17 machos e 16 fêmeas de 15 ninhadas; PN50: 16 machos e 17 fêmeas de 20 ninhadas) os cortes histológicos foram corados com Cresil-Violeta e foi utilizado o método do Disector. Resultados: Em PN47, o grupo ETOH apresentou aumento do número de células TUNEL+ em todas as regiões hipocampais analisadas (P<0,001). O grupo NIC apresentou maior número de células TUNEL+ nas regiões: GrDG, CA1 (P<0,01) Mol (P<0,001)e CA3 (P<0,05) em comparação ao grupo VEH. O grupo NIC+ETOH apresentou efeito menos severo, com aumento das células TUNEL+ somente na camada Mol (P<0,05). Estes resultados tiveram como paralelo redução da densidade neuronal nos grupos tratados comparados ao grupo VEH nas camadas MOL (ETOH e NIC P<0,001, NIC+ETOH P<0,05) , CA1 (ETOH e NIC P<0,01, NIC+ETOH P<0,001), CA2 (ETOH e NIC P<0,05, NIC+ETOH P<0,01) e CA3 (ETOH e NIC P<0,001, NIC+ETOH P<0,05), mas não no GrDG. Resultados semelhantes foram observados para densidade glial (MOL: ETOH e NIC P<0,001, NIC+ETOH P<0,05; CA1: ETOH e NIC P<0,01, NIC+ETOH P<0,001; CA2: ETOH e NIC P<0,01, NIC+ETOH P<0,001 e CA3: ETOH P<0,01, NIC e NIC+ETOH P<0,001). Em PN50, diferente do observado em PN47, houve redução no número de células TUNEL+ em comparação ao grupo VEH: o grupo ETOH apresentou redução nas células TUNEL+ nas camadas GrDG (P<0,01); CA1, CA2 e CA3 (P<0,05) mas não na camada Mol. O grupo NIC apresentou reduções em todas as regiões hipocampais quando comparadas ao grupo VEH (GrDG: P<0,001; Mol, CA1 e CA3: P<0,01; CA2: P<0,05), sendo o mesmo padrão de resultados identificado no grupo NIC+ETOH (GrDG: P<0,001; Mol, CA1, CA2 e CA3: P<0,01). Em paralelo, não houve diferenças nas densidades neuronal e glial entre os grupos de tratamento. Conclusões: Esses resultados sugerem que efeitos deletérios da nicotina e/ou etanol são revertidos com a manutenção da abstinência.