Resumo

Objetivos: A ativação de receptores P2Y1 por ATP é capaz de induzir a proliferação de progenitores de células gliais na retina embrionária de pinto, uma resposta que ocorre apenas em períodos precoces do desenvolvimento deste tecido (Int. J. Devl. Neuroscience, 20:21, 2002). Tendo em vista que a ativação de receptores P2X7 por ATP é capaz de inibir a proliferação de astrócitos (J. Neuroci. Res. 86:3096,2008), resolvemos avaliar neste estudo se a ativação destes receptores é capaz de modular a proliferação induzida por ATP de células de retina mantidas em cultura. Métodos: A proliferação celular foi avaliada através de experimentos de incorporação de [3H]-timidina em culturas obtidas de retinas de embriões de galinha com 7 ou 8 dias e mantidas por diversos períodos de tempo. Resultados: Quando culturas de células de retina em E8C8 foram tratadas por 48 h com concentrações crescentes de BBG, um antagonista de receptores P2X7, um aumento dose-dependente na incorporação de [3H]-timidina nas células foi observado. Uma estimulação máxima de ~ 54 % foi observada em concentrações iguais ou maiores do que 25 µM ( controle = 100 ± 7 %; BBG 25 µM = 154.7 ± 3 %; n = 2), sendo o EC50 estimado em 5. 3 µM. Este aumento na incorporação de [3H]-timidina também foi dependente do tempo de tratamento com BBG. Na concentração de 10 µM, o estímulo máximo foi observado após 8 h de tratamento (basal = 646.4 ± 124.3 cpm/cultura; BBG = 1426 ± 216.5 cpm/cultura; *p<0.05, n=3). O tratamento por 48 h com ATPoxi 200 µM, um outro antagonista do receptor P2X7, também promoveu um aumento de 72.5 % acima da incorporação basal de [3H] timidina nas culturas. Além disto, a adição conjunta de ADP 500 µM em culturas de E8C8 tratadas por 24 h com BBG 10 µM promoveu um aumento de 59% acima da incorporação basal de [3H] timidina (basal = 252.2 ± 28.7; ADP+BBG = 402.2 ± 50.8 cpm/cultura; n = 4). Nenhum efeito de UTP foi observado. Como esperado, em culturas de fases precoces do desenvolvimento, a adição de ADP 500 µM foi capaz de induzir um aumento na incorporação de [3H]]-timidina. Em culturas de E7C2, um aumento de 162 % acima da incorporação basal de [3H]-timidina foi observado. Já a adição de concentrações crescentes de Bz-ATP, um agonista seletivo para o receptor P2X7, foi capaz de inibir completamente o efeito proliferativo do ADP neste estágio de desenvolvimento das células (em cpm/cultura: basal = 905.1 ± 124.8; ADP = 2373 ± 159; ADP + Bz-ATP 10 µM = 1456 ± 154.7; ADP + Bz-ATP 30 µM = 1118 ± 190.9; ADP + Bz_ATP 100µM = 692 ± 89.6; p<0.0001, N=3). Conclusões: Estes resultados sugerem que a ativação do receptor P2X7 é capaz de bloquear a proliferação de progenitores induzida por ativação de receptores P2Y1 no início do desenvolvimento da retina. Além disto, tendo em vista que o bloqueio do receptor P2X7 é capaz de induzir a proliferação em um período mais tardio do desenvolvimento das culturas, nossos dados sugerem que a ativação de receptores P2X7 por ATP possa ser a responsável pelo término de proliferação de células gliais na retina embrionária de pinto.