Resumo

INTRODUÇÃO: A doença de Alzheimer (DA) é uma desordem neurodegenerativa influenciada por elementos genéticos e ambientais. O diagnóstico é baseado em parâmetros clínicos, mas sua confirmação ocorre somente post-mortem , após avaliação patológica. A identificação de biomarcadores baseados em tecido periférico como o sangue permitiria um diagnóstico menos invasivo e mais preciso, ou como preditor de predisposição, conversão, progressão ou resposta à tratamento. Para atingir tal objetivo, métodos de prospecção em larga escala de perfis de expressão gênica e protéica têm sido extensamente aplicados no estudo da doença, porém ainda sem resultados satisfatórios. OBJETIVO: O presente estudo se propôs a selecionar e validar, em pacientes com DA e controles idosos do Ambulatório de Geriatria do Instituto de Psiquiatria da USP, potenciais candidatos a biomarcadores bem como identificar potenciais biomarcadores pelo desenvolvimento de perfis proteômicos de plaquetas desses pacientes. MÉTODOS: Dados publicados de microarray que estudaram pacientes com DA foram comparados e genes com perfil de expressão similar em dois estudos independentes foram selecionados. Posteriormente, estes genes foram submetidos à validação por PCR em tempo real em amostras de cDNA de leucócitos de sangue periférico de 20 pacientes (16 mulheres, 4 homens, média de idades = 80,58 ± 6,29) e 20 controles idosos (16 mulheres, 4 homens, média de idades = 72,6 ± 4,68). Ao mesmo tempo, padronizamos e traçamos o perfil proteômico de pools de proteínas de plaquetas de pacientes (5 indivíduos, média de idades = 77,6 ± 7,06) e controles (5 indivíduos, média de idades = 70,6 ± 3,97) do sexo feminino e pacientes (5 indivíduos, média de idades = 73,5 ± 4,04) e controles (5 indivíduos, média de idades = 73,6 ± 6,54) do sexo masculino por Eletroforese Bidimensional (2-DE). RESULTADOS: Foram selecionados 8 genes com expressão diferencial confirmada por pelo menos 2 estudos independentes (HLADRB1, HLAB, CIRBP, S100A4, CALM1, ATP5J2, KIF1B, FLOT1). Após a validação por PCR em tempo teal três genes apresentaram expressão aumentada em DA em relação aos controles (Mann-Whitney, p< 0,05): proteína ligante de cálcio - S100A4 (média ± desvio padrão: DA = 1,4 ± 1,2; controles = 0,83 ± 0,42: 1,67 vezes maior), proteína motora – KIF1B (média ± desvio padrão: DA = 1,67 ± 1,3; controles = 0,78 ± 0,41: 2,16 vezes maior) e proteína associada à síntese de ATP - ATP5J2 (média ± desvio padrão: DA = 1,25 ± 0,64; controles = 0,77 ± 0,33: 1, 61 vezes maior). Estes genes podem estar envolvidos na resposta inflamatória e indução da apoptose. A padronização do perfil proteômico por 2-DE foi bem sucedida e um conjunto de 5 proteínas diferencialmente expressas para ambos os gêneros foram obtidas, cuja identificação ainda será feita por Espectrometria de Massas. CONCLUSÃO: Por ambas as técnicas foi possível identificar perfis diferentes de expressão gênica e protéica entre pacientes e controles idosos, demonstrando que sangue periférico é uma boa matriz de prospecção de biomarcadores de doenças neurodegenerativas. Será ainda necessária a validação em outras doenças para avaliarmos a especificidade desses achados na DA. Também não é possível ainda inferir se tais marcadores seriam determinantes de diagnóstico ou progressão da doença.