Resumo

OBJETIVOS A retina e as projeções retinocoliculares são amplamente utilizados para se estudar o fenômeno de degeneração secundária de neurônios do Sistema Nervoso Central (CNS). Diversos estudos têm utilizado o esmagamento do nervo óptico (ONC) como modelo um in vivo da morte das células ganglionares da retina (RGC), a fim de mimetizar eventos patológicos (e.g. neuropatias ópticas), na busca de fatores que promovam a sobrevida neuronal e a regeneração no CNS. Dados da literatura, incluindo do nosso grupo, mostram o papel neuroprotetor de citocinas (e.g. interleucina (IL)-2 e interleucina-4), tanto sobre as RGC axotomizadas quanto sobre outros tipos celulares retinianos in vitro, o que leva à necessidade da utilização de um modelo in vivo que possibilite o estudo do papel neurotrófico desta moléculas sobre as células retinianas. Portanto, os objetivos deste trabalho foram, analisar em ratos submetidos ao ONC: (1) o curso temporal da morte celular na camada de células ganglionares da retina (GCL); (2) o papel neuroprotetor da IL-2 sobre esta população celular. MÉTODOS Ratos da linhagem Lister Hooded, entre o 21º e o 28º dia pós natal, foram anestesiados com ketamina (40mg/Kg) e xilazina (4mg/Kg) e submetidos ao ONC, 3 vezes por 10 segundos, com uma pinça córnea previamente mergulhada em nitrogênio líquido. As lesões foram realizadas sempre no olho esquerdo e o olho direito foi utilizado como controle. A análise do curso temporal da morte celular foi realizada em diferentes períodos (1, 3, 4, 5, 7 e 14 dias). A fim de verificar o papel neurotrófico da IL-2, os animais receberam uma injeção intravítrea desta citocina, com diferentes concentrações (2500, 625 e 310 U/μL), imediatamente após a lesão e as análises foram realizadas 5 dias pós-lesão. Nos períodos determinados, os animais foram sacrificados utilizando-se uma câmara de CO2. Os globos oculares (com o nervo óptico) foram retirados, as retinas dissecadas e acomodadas em sua forma plana em lâminas. Os núcleos das células da GCL foram corados com Sytox Green, as preparações montadas com lamínulas e em seguida fotografadas em microscopia de fluorescência para posterior quantificação. RESULTADOS Os resultados mostraram que a lesão por ONC reduziu significativamente o número de núcleos, com uma grande perda celular entre o 3º e 5º dias e uma redução de 40% em relação ao controle. Esta redução foi acompanhada pelo aumento do número de núcleos com perfis picnóticos no mesmo período, indicando morte celular programada (MCP). Além disso, a administração intravítrea da IL-2, na concentração de 625 U/µL aumentou em 50% a sobrevida das células na GCL no período de 5 dias pós-lesão, além de reduzir o número de núcleos com perfis picnóticos. CONCLUSÃO Nossos dados demonstram a redução significativa do número de células GCL após o esmagamento do nervo óptico e o bloqueio da morte destas quando da administração intravítrea de IL-2 (625 U/µL), demonstrando, pela primeira vez a ação neuroprotetora in vivo desta citocina sobre as RGC de animais submetidos ao ONC.