Resumo

Introdução: A redução da oferta de oxigênio na vida perinatal resulta em danos no desenvolvimento do SNC e acarreta paralisia cerebral, atraso cognitivo e epilepsia em crianças. Recentemente, os efeitos de insultos intra-uterinos sobre o desenvolvimento do encéfalo foram avaliados em um modelo de hipoxia-isquemia (HI) peri-natal em ratos, que consiste na oclusão das artérias uterinas no 18º dia de gestação por 45 minutos. Neste modelo foi observado morte neuronal, astrogliose e morte de oligodendrócitos, lesões semelhantes às observadas em crianças que sofreram insultos de HI. A patogênese dos insultos cerebrais perinatais, parece envolver numerosas vias de sinalização através de citocinas e espécies de ROS, possivelmente produzidas por indução de NADPH Oxidase (Noxs) que nesses casos de injúria, parecem contribuir para quadros de neurotoxicidade e neurodegeneração através da superprodução de espécies reativas de oxigênio (ROS). Objetivos: Avaliar o padrão de expressão/distribuição celular de NADPH oxidase (subunidade P47phox) durante o desenvolvimento do cerebelo em animais pós-natos submetidos a um modelo de (HI), em comparação aos animais submetidos à simulação cirúrgica (SH) e não manipulados (NM). Métodos: Ratas Wistar grávidas no 18º dia de gestação são anestesiadas com tribomoetanol (Avertin®). Após laparotomia na linha média e exposição dos cornos uterinos da cavidade peritoneal, as quatro artérias uterinas são obstruídas com pinças hemostáticas por 45 minutos (Grupo HI). Após 45 minutos, as pinças hemostáticas são removidas e é feita a sutura por planos anatômicos. Nos animais SH - controle cirúrgico - os úteros são expostos, mas nenhum clampeamento é realizado. Os animais do grupo NM não passam por qualquer procedimento cirúrgico. Animais de cada grupo foram sacrificados em P9, P23 e P90 (n=4 animais por idade de ambos os sexos), perfundido-fixados com solução de paraformaldeído a 4%, e os encéfalos submetidos ao processamento histológico. Cortes parassagitais do cerebelo (25 µm) foram submetidos à imunohistoquimica para Nox P47phox. Todos os procedimentos foram aprovados pelo comitê de ética próprio da instituição, protocolo CEA/019/2010. Resultados: Animais P9 do grupo HI apresentaram intensa imunoreatividade para Nox P47phox na substância branca, camada granular e nas células de Purkinje. Nesta idade animais do grupo SH apresentaram um padrão de marcação semelhante ao grupo HI. Animais do grupo NM apresentaram um padrão de marcação menos intenso. Em P23 a marcação para Nox P47phox em células de Purkinje persiste apenas no grupo HI, além disso, há um perfil de marcação na camada granular nesse grupo que se mantém até P90. A partir de P23 no grupo SH o padrão de marcação se torna gradativamente menos intenso de forma que este grupo se assemelha ao grupo NM em P90. Conclusões: Nossos resultados sugerem que a manipulação cirúrgica provoca uma resposta inflamatória não persistente, observado pelo aumento da expressão da Nox P47phox em animais SH em P9 e P23. No entanto, animais submetidos à HI têm resposta inflamatória que se mantém até a vida adulta, esta resposta inflamatória pode ser responsável pela morte celular observada em outros estudos utilizando este modelo de HI. Apoio: CNPq, FAPERJ, SR2-UERJ.