Resumo

Humanos com mutações no gen que codifica a proteína Rb desenvolvem retinoblastoma, um câncer da retina. Estudos recentes em camundongos demonstraram que a proteína Rb, além de controlar a proliferação celular, também regula a diferenciação de alguns tipos celulares, incluindo fotorreceptores bastonete e células horizontais. Durante o desenvolvimento pós-natal, células horizontais pós-mitóticas migram e re-organizam seus prolongamentos de uma orientação ápico-basal para a orientação horizontal característica da retina adulta. Em retinas deficientes para Rb essa re-organização é defeituosa, pois, diferente do observado na retina selvagem, prolongamentos ápico-basais são comumente observados após a primeira semana pós-natal. Objetivos: Caracterizar o processo de re-orientação dos prolongamentos das células horizontais e estudar o papel de Rb na diferenciação destas células durante o desenvolvimento da retina. Metodologia: Em camundongos transgênicos condicionais (Chx10-Cre; Rblox/lox), Rb é deletado especificamente de células progenitoras da retina. Esses animais foram cruzados com camundongos GAD67-eGFP, nos quais as células amácrinas e horizontais expressam a proteína fluorescente verde (GFP). Culturas organotípicas (flatmounts) de retinas selvagens (GAD67-eGFP; Rblox/lox) ou deficientes para Rb (GAD67-eGFP; Chx10-Cre; Rblox/lox) de diferentes estágios de desenvolvimento foram cultivadas e imagens foram obtidas por microscópia multifotônica. As imagens foram analisadas usando o software Imaris. Resultados: Determinamos que a re-orientação dos prolongamentos de neurônios horizontais ocorre rapidamente durante o desenvolvimento pós-natal. A porcentagem de células horizontais com prolongamentos ápico-basais em retinas selvagens cai de 98% no dia pós-natal 3 (P3) para aproximadamente 10% em P5 (um total de 3897 células de 21 camundongos entre P1 e P9 foram quantificados). Análises preliminares de retinas deficientes para Rb no estágio P6 mostram células horizontais com prolongamentos horizontais e ápico-basais, sugerindo que o fenótipo descrito seja um defeito parcial na re-organização de alguns prolongamentos, e não um crescimento de prolongamentos verticais após a re-organização. Conclusões: Os resultados obtidos são a primeira descrição detelhada da cinética da re-organização dos prolongamentos das células horizontais durante o desenvolvimento da retina de camundongos. Nossos achados complementam os anteriores, mostrando que a diferenciação de células horizontais é severamente comprometida em retinas deficientes para Rb. Apoio Financeiro: FIRCA/NIH (R03TW008344-01)